हो सकता है कि आप किसी विज्ञान परियोजना के लिए प्रोटीन को अस्वीकार करना चाहते हों, या हो सकता है कि आपने विकृत भोजन के बारे में पढ़ा हो और जानना चाहते हों कि यह कैसे काम करता है। विकृतीकरण वह प्रक्रिया है जिसके द्वारा एक प्रोटीन गर्मी, विकिरण, एसिड और सॉल्वैंट्स सहित बाहरी ताकतों के कार्यों के कारण अपना आकार और संरचना खो देता है। कार्बनिक सॉल्वैंट्स आमतौर पर प्रोटीन को नकारते हैं। जिस तरह से आप किसी प्रोटीन को अस्वीकार करते हैं, वह उस विशेष पर निर्भर करता है जिसके साथ आप काम करना चाहते हैं, क्योंकि उन सभी को अलग-अलग स्तरों पर अलग-अलग विकृतीकरण एजेंटों की आवश्यकता होती है। अधिकांश किसी भी प्रोटीन को विकृत किया जा सकता है, हालांकि, यदि आप जानते हैं कि प्रोटीन के वातावरण में क्या परिवर्तन करना है।
कदम
विधि 1 में से 2: प्रोटीन को विकृत करना
चरण 1. गर्मी का प्रयोग करें।
गर्मी एक प्रोटीन को नकारने के सबसे आसान तरीकों और सबसे सामान्य तरीकों में से एक है। जब प्रश्न में प्रोटीन भोजन में मौजूद होता है, तो केवल खाना पकाने से प्रोटीन का खंडन होगा। कई प्रोटीनों को 100 डिग्री सेल्सियस (212 डिग्री फारेनहाइट) के तापमान या उससे अधिक के तापमान पर उजागर करके विकृत किया जा सकता है। यह प्रोटीन को उनकी घुलनशीलता को जमाने और कम करने की अनुमति देता है।
एक्सपोजर की लंबाई इस बात पर निर्भर करती है कि आप गर्मी के संपर्क में क्या कर रहे हैं। उदाहरण के लिए, एक अंडा एक कड़ाही में मध्यम आँच पर पाँच मिनट में पक सकता है, जबकि एक रोस्ट को ओवन में पकाने में घंटों लग सकते हैं।
चरण 2. शराब लागू करें।
अल्कोहल पेप्टाइड बॉन्ड के एमाइड समूहों के बीच होने वाले हाइड्रोजन बॉन्ड को बाधित करता है। जब एक प्रोटीन अल्कोहल के घोल के संपर्क में आता है, तो अल्कोहल के अणु प्रोटीन श्रृंखला के साथ नए बंधन बनाते हैं। बैक्टीरिया की कोशिका भित्ति को तोड़ने और प्रोटीन को नकारने के लिए 70% अल्कोहल के घोल का उपयोग करें।
केंद्रित अल्कोहल खतरनाक हो सकता है, क्योंकि वे ज्वलनशील और विषाक्त दोनों हैं। हमेशा दस्ताने और आंखों की सुरक्षा सहित पूर्ण सुरक्षा उपकरण पहनें, और एक सुरक्षित, तापमान नियंत्रित वातावरण में संभालें।
चरण 3. पीएच बदलें।
एक प्रोटीन की आंतरिक संरचना को तोड़ा जा सकता है जब उसका वातावरण बहुत अम्लीय या बहुत क्षारीय होता है, क्योंकि वे प्रोटीन के नमक पुलों को एक साथ रखने वाले आयनिक बंधनों को बाधित करते हैं। प्रोटीन में अम्ल या क्षार विलयन मिलाएं। विकृतीकरण को प्रोत्साहित करने के लिए आसपास का वातावरण 10 से ऊपर या 4 से नीचे के पीएच पर होना चाहिए। यदि आप एसिड के साथ परिवर्तन को प्रेरित कर रहे हैं, तो पीएच 2 और 5 के बीच होना चाहिए।
पीएच बदलने से उस अमीनो एसिड में प्रत्येक कार्यात्मक समूह के पीकेए के आधार पर एक एमिनो एसिड को आयनित किया जा सकता है। आप अमीनो एसिड में मौजूद अमीनो समूह या कार्बोक्सिल समूह को भी आयनित कर सकते हैं।
चरण 4. भारी धातु के लवण का प्रयास करें।
भारी धातुएं प्रोटीन में बंधनों को बाधित कर सकती हैं, जिससे इसकी संरचना खो जाती है। भारी धातुओं के लवण जैसे पारा और सीसा का उपयोग विभिन्न प्रोटीनों को नकारने के लिए किया जा सकता है। इस तरह के लवण अधिकांश रासायनिक आपूर्तिकर्ताओं से उपलब्ध हैं, और हमेशा सावधानी और उचित सुरक्षा उपकरण सहित दस्ताने और आंखों की सुरक्षा के साथ उपयोग किया जाना चाहिए।
भारी धातुएं प्रोटीन के कार्यात्मक पक्ष श्रृंखला समूहों के साथ परस्पर क्रिया कर परिसरों का निर्माण कर सकती हैं। भारी धातुएं प्रोटीन की अमीनो एसिड साइड चेन का ऑक्सीकरण भी करती हैं।
विधि २ का २: प्रोटीन का पुनर्वितरण
चरण 1. निर्धारित करें कि क्या एक प्रोटीन वापस आ सकता है।
विकृतीकरण के कुछ रूप स्थायी होते हैं, जबकि अन्य को पूर्ववत किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, अंडे या मांस को पकाना पूर्ववत नहीं किया जा सकता है, लेकिन एक उच्च पीएच के संपर्क में आने वाला प्रोटीन अधिक तटस्थ वातावरण में रखे जाने पर आकार प्राप्त कर सकता है।
प्रोटीन वापस आ सकता है या नहीं यह उसके डीएनए पर निर्भर करेगा। डीएनए प्रोटीन को उसकी मूल स्थिति में लौटने के लिए आवश्यक जानकारी रखेगा।
चरण 2. विकृतीकरण कारक को हटा दें।
प्रोटीन के आसपास के वातावरण को ठहराव पर लौटाएं और विकृतीकरण तत्व को हटा दें। उदाहरण के लिए, अम्ल या क्षार निकालें, या प्रोटीन को अधिक उचित तापमान पर वापस लाएं।
चरण 3. एक पुनर्रचना किट का प्रयोग करें।
कई प्रयोगशाला आपूर्ति कंपनियाँ पुनर्रचना किट बेचती हैं जो आपको पुनर्जीवन को प्रोत्साहित करने के लिए सर्वोत्तम मापदंडों के लिए स्क्रीन करने की अनुमति देती हैं। यदि आप किसी प्रयोगशाला या प्रायोगिक सेटिंग में प्रोटीन देख रहे हैं तो ऐसी किट विशेष रूप से सहायक हो सकती हैं।
टिप्स
- एक विकृत प्रोटीन अपनी चतुर्धातुक, तृतीयक और द्वितीयक संरचना खो देता है जो कि उसकी मूल अवस्था में स्पष्ट है, लेकिन इसकी प्राथमिक संरचना बनी रहेगी।
- एक विकृत प्रोटीन भी अपनी कुछ जैव-सक्रियता खो देता है, कुछ मामलों में, एंजाइमों के साथ, कार्य करने की अपनी क्षमता खो देता है। उदाहरण के लिए, सब्सट्रेट अब उन एंजाइमों से बंधने में सक्षम नहीं हो सकते हैं जिन्हें विकृत किया गया है।
- विकृत प्रोटीन विलयन में अपनी विलेयता खो सकता है।
- आप स्ट्रैंड को अलग करने के लिए प्रयोगशाला तकनीकों का उपयोग करके न्यूक्लिक एसिड को भी अस्वीकार कर सकते हैं।